C4反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈-水中的；由于色譜柱在儲存或運(yùn)輸過程中固定相可能會干掉，這會引起鍵合相的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。因此，新的色譜柱在用來分析樣品之前，請一定要充分平衡色譜柱。
C4反相色譜柱的平衡方法是：以純乙腈或甲醇作流動相，首先用低流速0.2ml/min將色譜柱平衡過夜（請注意斷開檢測器?。?，然后，將流速增加到0.8mL/min沖洗30min以便將色譜柱的填料充分平衡至*狀態(tài)。平衡過程中，將流速緩慢地提高直到獲得穩(wěn)定的基線，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。請一定確保所使用的流動相和乙腈-水互溶。如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意首先用20倍柱體積的5%的乙腈-水流動相“過渡”，然后使用分析樣品的流動相直至得到穩(wěn)定的基線。
對于正相色譜柱來講，硅膠柱或極性色譜柱需要更長的時(shí)間來平衡。這些色譜柱在出廠測試后是保存在正庚烷中的，如果極性色譜柱需要使用含水的流動相，請?jiān)谑褂昧鲃酉嘀坝靡掖蓟虍惐计胶狻?strong>C4反相色譜柱當(dāng)使用乙醇、異丙醇、乙酸等粘度大的流動相時(shí)，色譜柱的平衡時(shí)間要延長，甚至要加倍。
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