C18反相色譜柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟(jì)和有效的保護(hù),延長了色譜柱的壽命,保證分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時(shí)間的增加,高效液相色譜柱分離效能下降,柱壓增高,其原因主要是由于色譜柱進(jìn)口段的少量填料被污染引起的,而色譜柱整個(gè)柱床并未被破壞,使用保護(hù)柱,相當(dāng)于在色譜柱前增加了一段額外的填料,起到了保護(hù)整個(gè)色譜柱的作用。
反相色譜柱是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相,極性有機(jī)溶劑的水溶液為流動(dòng)相,根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣,RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面*被非極性基團(tuán)所覆蓋,表現(xiàn)出強(qiáng)烈的疏水性。因此,必須用極性有機(jī)溶劑(如甲醇、乙腈等)或其水溶液進(jìn)行溶質(zhì)的洗脫分離。
C18反相色譜柱是一種常見的色譜分離技術(shù),具有以下優(yōu)勢(shì):
1、對(duì)極性化合物的分離效果好:反相色譜柱使用非極性固定相,因此對(duì)于極性化合物來說具有較好的分離效果。例如,疏水性蛋白質(zhì)、核酸和多肽可以用反相色譜柱進(jìn)行有效的分離。
2、適用范圍廣:反相色譜柱可以分離各種樣品類型,包括藥物、天然產(chǎn)物、化學(xué)物質(zhì)等。同時(shí),針對(duì)不同的樣品類型,也可以選用不同的反相色譜柱進(jìn)行分離。
3、操作簡(jiǎn)便:反相色譜柱通常不需要太復(fù)雜的操作步驟,只需要一些基本的實(shí)驗(yàn)技能就可以進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)。此外,反相色譜柱的固定相具有很高的穩(wěn)定性,可以重復(fù)使用。
4、分離速度快:反相色譜柱具有較高的分離速度,可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成分離實(shí)驗(yàn)。
5、可以進(jìn)行大量自動(dòng)化應(yīng)用:隨著技術(shù)的發(fā)展,反相色譜柱可以與其他分析儀器結(jié)合使用,如質(zhì)譜儀、光譜儀等,實(shí)現(xiàn)高通量分析。同時(shí),反相色譜柱也可以進(jìn)行自動(dòng)化應(yīng)用,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。
總之,C18反相色譜柱是一種重要的色譜分離技術(shù),具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域和特的優(yōu)勢(shì)。