氨基柱的反相使用步驟是如何的

　　氨基柱是同時(shí)可以用于正相和反相條件的一種色譜柱。但正相溶劑和反相溶劑是不互溶的，這一點(diǎn)不能忽略。對于新購柱子，首先請注意打開分析測試說明書，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶，請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大，會導(dǎo)致柱壓很高，適當(dāng)調(diào)低流速。如果流動相中還有緩沖鹽類，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，避免緩沖鹽的析出。

　　氨基柱的反相使用步驟：

　　1、先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)沖柱子。

　　2、以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0)，立即用水(0.5ml/min的流速，30倍柱體積)沖洗，再換成流動相。

　　3、配制流動相時(shí)，應(yīng)各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。

　　4、反相條件下使用時(shí)，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。的pH范圍在

　　5、如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類，建議在用分析流動相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。

　　6、有一種情況是，當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí)，酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在，可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。