疏水色譜柱能夠有效分離抗體的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體。在抗體藥物中，對于一些由于等電點相同而無法通過離子交換色譜法實現(xiàn)分離的，但表面疏水性有差異的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體、或多聚體，可以考慮使用疏水色譜法來進(jìn)行分析。并且疏水色譜法也可以用于抗體降解產(chǎn)物的分析。
疏水色譜柱安裝的正確步驟如下：
1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng)，確保系統(tǒng)干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。
2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。
3、將疏水色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標(biāo)明正確流向。
4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5mL/min。
5、當(dāng)溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上（這樣可以避免氣泡進(jìn)入檢測系統(tǒng)，并且可快速達(dá)到基線平衡）。
6、重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規(guī)分析時所使用的流速。
7、參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩(wěn)定。
8、測試疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請廠家部門尋求支持，使用合適的濃度與進(jìn)樣量。柱效結(jié)果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài)，需要進(jìn)行故障排查。當(dāng)使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時，建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬，包括：使用檢測器微量流通池，減少進(jìn)樣器loop環(huán)體積，使用較小內(nèi)徑（如0.005''或0.12mm）的系統(tǒng)管路。并確保管路與疏水色譜柱連接恰當(dāng)、無死體積。
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