解讀氨基柱測酸性樣品的HILIC模式

●氨基柱測酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。

●氨基柱不能在低PH值下使用,會水解的,這樣柱子就報廢了。

●關(guān)于反沖的問題,只要是柱子端頭和端尾篩板直徑一致,*可以反沖,并且反沖對柱子是很有必要的,因為流動相長時間往一個方向流動會造成C18官能團朝一個方向“倒伏”,這樣對分析造成影響,反沖可以使官能團“豎立”,對分析有利。

●如果用一個質(zhì)量好的又和分析柱匹配保護柱,應(yīng)該不會影響分析。匹配指的選用柱芯填料和分析柱填料在粒徑和固定相類型上一致,質(zhì)量好,首先要求柱芯裝填質(zhì)量一定要好,不能因為是柱芯,就隨便把填料用干法往里面一放就完事了;另外柱芯卡套接入系統(tǒng)的產(chǎn)生的死體積要小。

一個質(zhì)量好的保護柱,有時還能增加分離柱效。

●用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水經(jīng)常出現(xiàn)?；蜻M氣泡這是什么原因:這個比例下因為使得流動相黏度zui大,所以zui容易產(chǎn)生氣泡了,一般我們設(shè)計洗脫程序都避開這個比例。

●水/甲醇比例在55:45時,黏度和柱壓有個極大值。50:50接近了這個極值,柱壓是比較高的,但影響柱壓zui大的還是填料粒徑和色譜柱內(nèi)徑。系統(tǒng)壓力高,可能會因溶劑泵中的過濾頭供液速度跟不上而導(dǎo)致氣泡進入系統(tǒng),停機也應(yīng)該是因為氣泡進入壓力下降的原因,可考慮更換液體通量更大的過濾頭。

●色譜柱被強保留物質(zhì)污染后,保留時間提前和滯后的情況都有,具體要看污染物的性質(zhì),還要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情況,情況比較復(fù)雜,有時候比較難預(yù)測是提前還是滯后。不過你平時維護的時候,注意在測定后將污染物用有機溶劑反沖清洗,就可以減輕或避免這種情況的出現(xiàn)。建議每個分析方法用專門的色譜柱,長遠看,這樣更節(jié)省色譜柱的費用。

●色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過程中用特殊的化學(xué)試劑(一般稱為衍生化試劑或標記試劑)使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。目的為:1.將紫外—可見強吸收功能基團引入被檢測對象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?以提高檢測靈敏度;2提高對分析樣品的分離和選擇性。長度和粒徑都是用來改變柱效的,氨基柱選擇原則是夠用就好。