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消除TSK凝膠色譜柱脫水現(xiàn)象的正確步驟

更新時(shí)間:2018-01-23瀏覽:2012次
TSK凝膠色譜柱的脫水現(xiàn)象,可能是因?yàn)槭褂貌划?dāng)或長(zhǎng)期放置保存過程中造成的。有些TSK凝膠色譜柱中由于沒有氣密密封圈,這種情況下色譜柱會(huì)隨時(shí)間而易發(fā)生干燥現(xiàn)象。對(duì)于其他的所有種類色譜柱如不銹鋼或玻璃柱等,如果柱栓未擰緊或者使用過程中空氣意外進(jìn)入到色譜柱中,均可能發(fā)生柱子干燥的情況。很容易就可以辨認(rèn)到玻璃色譜柱出現(xiàn)的脫水現(xiàn)象,因?yàn)榭梢院苋菀椎乜吹礁稍锏奶畛湮锱c柱壁分離的現(xiàn)象。我們推薦采用下列步驟,以消除TSK凝膠色譜柱的脫水現(xiàn)象:
1. 按照相反的流動(dòng)方向?qū)⑸V柱連接到液相系統(tǒng)上;
2. 不要將色譜柱與檢測(cè)器相連;
3. 以推薦zui大流速的一半流速,使用濾過的20%乙醇超純水溶液進(jìn)行色譜柱的過柱;
注意:反相色譜柱需要使用60%的乙醇。
4. 繼續(xù)重復(fù)上述程序,直到您確信色譜柱已經(jīng)再水化處理完畢。再水化處理可能需要
幾個(gè)小時(shí)的時(shí)間,這取決于色譜柱的尺寸大??;
5. 按照正確的流動(dòng)方向?qū)⑸V柱連接到液相系統(tǒng)上;
6. 如果有機(jī)物不是正常流動(dòng)相的一部分的話,要使用3個(gè)柱體積的超純水沖洗色譜柱
以去除有機(jī)物;
7. 使用上樣緩沖液進(jìn)行柱平衡(通常使用3——5個(gè)柱體積);
8. 使用QC 測(cè)試方法評(píng)價(jià)柱子的性能,以確保色譜柱能夠正常使用。
除鹽:對(duì)普通反相 C18 鍵合相柱,為除去柱中含有的緩沖鹽類或水溶性物質(zhì)時(shí),不應(yīng)使用純水沖洗。因?yàn)?C18 鍵合相像一條長(zhǎng)鏈將硅膠黏結(jié),當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí),其表面被流動(dòng)相潤(rùn)濕, C18 長(zhǎng)鏈*展開,像海水中的海藻一樣。當(dāng)純水或緩沖溶液通過時(shí), C18 鍵合相不能被浸潤(rùn),鍵合相表面會(huì)塌陷,從而將溶劑、樣品分子或無機(jī)鹽分子包合。此時(shí)僅用純水無法將包合物洗脫出,應(yīng)使用含 5 %有機(jī)溶劑的水溶液沖洗,以清除無機(jī)鹽或水溶性物質(zhì)。
蛋白污染:如果需從硅膠鍵合固定相清洗蛋白質(zhì)殘留物,必須使用和前述不同的程序。如果生物材料血漿或血清樣品注入色譜柱,在大多數(shù)情況下,純有機(jī)溶劑 ( 如乙腈或甲醇 ) 并不能溶解肽和蛋白質(zhì),用它們清洗色譜柱是無效的。然而,有時(shí)使用有機(jī)溶劑與緩沖物、酸或離子對(duì)試劑的混合物卻是有效的。
由于污染物聚集在色譜柱頭,逆向沖洗會(huì)縮短污染物在柱中遷移的距離;又因?yàn)樯V柱皆在高于操作壓力下填充的,通常逆向液流不會(huì)擾動(dòng)色譜柱床。但如果色譜柱頂端過濾篩板的孔徑大于柱底部過濾篩板的孔徑,則固定相的微小粒子會(huì)在逆向沖洗過程通過篩板流出柱,從而會(huì)在柱中產(chǎn)生新的死空間引起柱床松動(dòng)。因此在逆向沖洗前,應(yīng)先確認(rèn)柱管兩端過濾篩板的孔徑一致。
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